方法简介:
实验室分离的人肠微血-管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的人肠微血-管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:
包被条件 | PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%) |
培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
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换液频率 | 每2-3天换液一次 |
生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 内皮细胞样 |
传代特性 | 可传2-3代 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
人肠微血-管内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最-佳培养状态。
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。