ELISA检测试剂盒 检测原理、操作步骤、注意事项如下:

1.原理:免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理,对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法,酶联免疫吸附分析(下称ELISA)是免疫分析的一种,分三个部分组成:免疫识别,信号输出和数据处理。

2.步骤:免疫识别是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗体,而后利用抗体识别待测的抗原(通常是疾病的蛋白质生物标记物,病毒,细菌等等,从复杂待测液中将抗原吸附到96孔板表面。接着用带有辣根过氧化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)、荧光或放射性标记的抗体通过直接或者间接的方式输出识别信号。最-后利用信号强度,标准样品浓度梯度等信息计算得出待测样中目标抗原的浓度。

3.分类:根据免疫识别和信号输出方式的不同,ELISA可以分为双抗体夹心法、直接免疫竞争法和非直接免疫竞争法等等。其中双抗体夹心法在商业应用上最常见。

注意事项:

1.所有的操作过程一般都用排枪处理,在操作过程中,排枪吸两档打一档,会防止气泡的产生,并且操作时一定要保证枪头每步都要插紧,选择配套的枪头尤为重要,枪头容易掉,影响实验效果,此外每一步都要看好枪头的页面要平齐,避免枪头松动自己却不知。

2.在处理稀释标准品的过程中,要在涡旋仪上点一下,使混匀,但振荡过程不宜过长,防止出现蛋白质降解变性的现象

3.二抗的稀释浓度对显色效果起着至关重要的作用,每次选用新的二抗或在-80度冰箱拿分装好的二抗最-好是每一次都做一个预实验,设置不同的二抗浓度和显色时间,从而确定相应的条件,方可做好大规模的筛选细胞工作。

4.同种细胞株的ELISA孵育时间要保持一致,降低无关变量的影响。

5.各种抗体的保存最-好是在-80度冰箱,一定要将降低冻融次数,蛋白比较敏感,冻融次数多,蛋白活性就会降低。

6.稀释样品时一定要保证混匀,枪尖在液面以下吹打相同的次数,可防止出现气泡。

7.分析数据的过程中,一般至少要5个点,不然数据没有相应的说服力。

8.96孔板取完样品后,盖好,提早加好DPBS稀释液,防止时间过长,样品挥发,浓度不准。
免责声明:
1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。