◆细胞为什么会衰老：

1、过量的大分子交联是衰老的一个主要因素，如DNA交联和胶原胶联均可损害其功能，引起衰老。

2、细胞代谢产物积累至—定量后会危害细胞，导致细胞的衰老。

3、自由基含有未配对电子，具有高度反应活性，可引发链式自由基反应，引起DNA、蛋白质和脂类，尤其是多不饱和脂肪酸等大分子物质变性和交联，损伤DNA、生物膜和重要的结构蛋白和功能蛋白，从而引起衰老各种现象的发生。

4、存在于细胞内部提供能量的线粒体，其遗传基因很容易发生突变，变异的积累很可能是人体老化的原因之—。

细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。怎么可以检测出来细胞衰老呢？按照以下检测方法步骤操作可以检测出细胞衰老：

◆细胞衰老检测方法与步骤：

（1）细胞接种前在6孔培养板中预先放置灭菌的细胞片，每孔加入1×10E5个细胞，37℃ 5% CO2条件下培养过夜，使细胞在细胞片上生长。

（2）在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液，加入×1 PBS，洗涤细胞1次，随后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室温条件下固定3~5分钟。

（3）吸弃2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗涤细胞3次，每次3分钟。

（4）吸弃×1 PBS，加X-Gal溶液以浸没细胞片为宜，37℃孵育4~8小时或过夜，用保鲜膜包被6孔培养板以防染液蒸发。

（5）取出细胞爬片，去离子水冲洗2次，再次用固定液固定4分钟，流水轻轻冲洗。

（6）将细胞爬片按此顺序脱水、透明∶95%酒精I（2分钟）→95%酒精Ⅱ（2分钟）→100%酒精I（2分钟）→100%酒精I（5分钟）→二甲苯I（2分钟）→二甲苯Ⅱ（2分钟）。

（7）中性树胶封片。

（8）在普通光学显微镜下观察衰老细胞形态。

每张片子镜下计数400个细胞，确定X-Gal染色阳性细胞（衰老细胞）在细胞群体中的所占的百分比即衰老细胞率（蓝染细胞数/总计细胞数×100%）。

◆细胞衰老检测注意事项：

①X-Gal溶液需要现用现配。

②细胞固定时间过长或固定之后清洗不干净，均会影响后续的酶反应。